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    消除微生物污染

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-06  點(diǎn)擊次數: 741次

    原理

    通過(guò)沖洗單層培養物或通過(guò)離心重懸非貼壁細胞,以高濃度抗生素清洗培養物數次,然后將培養物傳代,用加抗生素的培養基傳三次,再用不加抗生素的培養基傳三次,每次傳代后都要檢測是否污染。

    材料與儀器

    DBSS
    高濃度抗生素培養液
    用于傳代培養的材料 帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡 用于支原體染色的材料

    步驟

    1. 仔細收集污染培養液,如有可能,應測試該有機體對一系列抗生素的敏感性,如果做不到,則應對培養液進(jìn)行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

    2. 用 DBSS 沖洗細胞(每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個(gè)對數級,除非污染物黏貼在細胞上)。

    (a)對于單層培養物,用 DBSS 沖洗培養物三次,然后用胰蛋白酶處理,再用 DBSS 通過(guò)離心與再懸浮清洗細胞兩次以上。

    (b)對于懸浮培養物,通過(guò)離心和重懸,用 DBSS 沖洗培養物 5 次。

    3. 將細胞以盡可能低而又合適的細胞濃度接種于新的培養瓶?jì)取?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    4. 加入含高濃度抗生素的培養基,每?jì)商鞊Q一次。

    5. 用高濃度抗生素培養基進(jìn)行傳代培養。

    6. 重復進(jìn)行 1~4 的步驟,傳代培養三次。

    7. 移去抗生素,在無(wú)抗生素情況下,將這些細胞再進(jìn)行三次傳代培養。

    8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養物。

    9. 對這些細胞再進(jìn)行兩個(gè)月的培養,不加抗生素,檢査以確定所有污染已被消除。

    常見(jiàn)問(wèn)題

    一般的原則是應將污染的培養物丟棄,而不要試圖去除污染,除非是至關(guān)重要必須保留的細胞系才考慮去除污染。在任何情況下,很難做到完-全消除污染。特別是在酵母污染時(shí),如果試圖去除污染,可能導致產(chǎn)生更頑固的對抗抗生素的細胞。


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