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共轉化,篩選轉染細胞的實(shí)用工具
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-11 點(diǎn)擊次數: 998次想要達到轉染的目的,即分析轉染基因的功能和表達,需要轉染的基因穩定整合進(jìn)入宿主染色體。
根據細胞類(lèi)型,細胞群體中,最高有80%的細胞,以瞬時(shí)表達的方式表達轉染的基因。但對于穩定轉染,好的情況,也只有1/1000的成功率——細胞能穩定表達轉染的基因。
所以,我們需要通過(guò)篩選活的新表型(標記)的細胞,來(lái)分離穩定轉染體。方法是將標記的基因和待轉染的基因進(jìn)行重組、連接,共同轉染到細胞核內。這種物理上沒(méi)有關(guān)聯(lián)的基因整合成1個(gè)序列,并在同一轉化細胞內表達的這種現象,叫做共轉化。
那么,篩選具體是如何進(jìn)行的呢?
一般情況下,這個(gè)標記是某種編碼抗生素抗性的基因,和待轉染基因一起在細胞上表達,如第一個(gè)在哺乳動(dòng)物細胞上廣泛使用的篩選基因,編碼胸苷激酶(TK)的病毒基因。
待轉染的細胞系,是不含TK的哺乳動(dòng)物細胞系,在轉染成功后,才會(huì )變成含TK的細胞系,才能在氨基嘌呤存在的培養基中生存。
因此,共轉化是一個(gè)篩選細胞的實(shí)用方法。
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