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凍存細胞的這些坑,你踩過(guò)嗎?
發(fā)布時(shí)間: 2021-09-23 點(diǎn)擊次數: 1530次凍存細胞的錯誤時(shí)機主要有:細胞量太少,細胞狀態(tài)不好,細胞變形嚴重,或者細胞生長(cháng)堆積,一旦生長(cháng)過(guò)平頂期,培養基就會(huì )變得很黃,細胞可疑污染;鏡下觀(guān)察細胞有很多碎片或者不明物;培養時(shí)間過(guò)長(cháng),連續培養超過(guò)二個(gè)月,細胞性狀已有改變。
選擇細胞凍存的最佳時(shí)機:細胞增殖旺盛,情況穩定,試驗效果良好,復蘇后兩周內開(kāi)始凍存一批,再往下傳的用來(lái)做實(shí)驗。
細胞太少
凍存時(shí)細胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復蘇很難成功,原因:細胞和細胞間會(huì )又間隙接觸反應, 解決:離心后調整細胞濃度,把細胞種更小的孔板中.
培養基很黃,凍存細胞后復蘇不長(cháng)
在細胞生長(cháng)平頂期凍存的細胞會(huì )在解凍后有幾天停滯狀態(tài),原因:細胞在生長(cháng)平頂期已經(jīng)停止生長(cháng),凍存后也保持互相間抑制的信號,解決辦法:用胰酶消化重新鋪板;
細胞污染或者很多小黑點(diǎn)
凍存管的蓋子一定要擰緊,否則復蘇水浴時(shí)會(huì )滲水,造成污染。復蘇細胞的時(shí)候盡量避免凍存管接縫處沾水,防止支原體污染,實(shí)驗室定期用過(guò)氧化氫熏蒸,細胞小黑點(diǎn)增多時(shí)用支原體檢測試劑盒檢測,并且及時(shí)清除,趁高溫假給細胞來(lái)次清潔吧,支原體去除試劑,*防止支原體污染好幫手。
程序降溫盒導致的細胞復蘇不活
放在-80 度的凍存盒,壁太薄,細胞在被迅速降溫,使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠,導致細胞內產(chǎn)生大量冰晶殺死細胞.
推薦品牌無(wú)血清細胞凍存液,凍存液含有抗氧化因子,可在細胞凍存時(shí)防止細胞產(chǎn)生氧化反應,給細胞一個(gè)好的休眠環(huán)境,含有抗凍組分,讓大部分細胞免受冰晶殺戮,好不好用一下就知道!
-80°存放太久導致的細胞復蘇不好
原因:冰箱的溫度難以恒定:開(kāi)門(mén) / 關(guān)門(mén)過(guò)于頻繁,冰箱電壓不穩等.解決辦法:盡快轉入液氮。
液氮不足
液面不能漫過(guò)所有細胞。解決:定期測量液氮儲備,保證細胞全部浸在液面下,小提醒:有幾個(gè)細胞需要氣相保存的,不能浸入液氮里,挪細胞的時(shí)候需要注意一下。
取錯細胞
找不到 / 拿錯凍存管。原因:沒(méi)有標記好細胞,沒(méi)有做好庫存記錄,解決:凍存細胞時(shí)在每支凍存管都標上細胞的名稱(chēng),凍存時(shí)間,并記錄在冊。
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