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    分享哺乳動(dòng)物細胞培養的9個(gè)基本技巧!

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-22  點(diǎn)擊次數: 1796次

    一、凈化空氣

    在開(kāi)始任何組織培養工作之前,打開(kāi)新風(fēng)系統至少15分鐘,確保有清潔的空氣流入。要始終確保沒(méi)有任何東西覆蓋它。每周打開(kāi)紫外線(xiàn)燈3-4次,最多半個(gè)小時(shí),可以幫助保持你的實(shí)驗室無(wú)污染,但你應該記住,紫外線(xiàn)只會(huì )殺死它直接照射到的微生物。紫外線(xiàn)照射對眼睛和皮膚也是有害的,所以在使用遮光罩時(shí),請保持光線(xiàn)關(guān)閉。在工作前后用消毒劑擦拭超凈臺(大多數人使用70%的乙醇,但你也可以使用Incidin濕巾)。


    二、遠離污染物

    雖然你很可能是實(shí)驗的主要污染源,但是你*有必須要采取你所及的的預防措施,防止細胞受到污染。用70%乙醇擦拭實(shí)驗室的所有東西,包括你戴手套的手!你還應該在開(kāi)始之前把所有的珠寶和你戴的手表都取下來(lái)。此外,避免不必要的交談,因為交談會(huì )產(chǎn)生微生物氣溶膠,可能會(huì )進(jìn)入超凈臺。在進(jìn)入實(shí)驗室前*計劃你的實(shí)驗是另一個(gè)防止污染的好方法。這聽(tīng)起來(lái)很瑣碎,但往往能在問(wèn)題出現之前解決大多數問(wèn)題。有了適當的計劃,你就可以確切地知道你需要把什么材料帶進(jìn)實(shí)驗室,并且可以帶入之前把它們都擦干凈。


    三、分裝試劑,保持實(shí)驗室整潔

    儲物柜最好不要帶護罩。雜亂無(wú)章不僅使你的工作區很難清潔干凈,而且還會(huì )破壞工作區周?chē)膶恿鳉饬鳌4_保只將所需材料帶入工作區域。這將給你足夠的空間自由移動(dòng)而不會(huì )造成泄漏。另外,當液體容器不能立即使用時(shí),請將其蓋緊。防止泄漏,但如果發(fā)生任何泄漏,應立即用70%乙醇擦拭。最后,避免將移液管直接插入培養基瓶中,而應先將溶液倒入一次性無(wú)菌管中,分裝使用不但能方便管理更能避免出現大規模的污染。


    四、確保細胞不要離開(kāi)培養箱太久

    當你準備東西的時(shí)候,確保你的細胞不會(huì )在外面呆太久。培養箱的舒適區通常在37度左右°5%的二氧化碳,溫度突然變化(尤其是開(kāi)空調的時(shí)候)會(huì )讓細胞變得焦躁不安,所以把它們放在無(wú)菌培養箱中。這也意味著(zhù)任何與細胞接觸的培養基或洗滌緩沖液,如PBS(磷酸鹽緩沖鹽水),都應該在37°C.這也是大多數實(shí)驗室都有一個(gè)37度的水浴目的。


    五、注意細胞的形狀和大小

    你應該在超凈臺附近放一個(gè)光學(xué)顯微鏡,這樣你可以定期觀(guān)察你的細胞(在進(jìn)入實(shí)驗室之前和將它們放入培養箱時(shí))。這也有助于熟悉你正在使用的細胞系的形態(tài),以便識別交叉污染。即使某些哺乳動(dòng)物細胞系具有相似的形態(tài),但是觀(guān)察細胞是否污染,顯微鏡一定不可少。


    六、合理的設置細胞傳代

    不要偷懶于分割細胞,而要形成一個(gè)常規。對于大多數快速生長(cháng)的細胞系(如HEK293,每16小時(shí)增殖一次),一周兩次通常有效。例如,如果你在星期一將細胞稀釋1:5進(jìn)行傳代,你應該可以在下一個(gè)星期四,或者最遲在星期五進(jìn)行分裂。最好在細胞板80-85%匯合之前分裂細胞,因為細胞這個(gè)時(shí)候屬于生長(cháng)鼎盛期。如果它們達到匯合點(diǎn),就會(huì )進(jìn)入平頂期,它們就會(huì )停止生長(cháng)(接觸抑制),經(jīng)過(guò)傳代后需要時(shí)間才能恢復。這可能會(huì )改變它們的生長(cháng)速率和形態(tài),使得它們不適宜繼續用于需要可復制結果的實(shí)驗。大多數細胞培養基含有pH指示劑酚紅(pH范圍6.0(黃色)-8.0(紅色))。血液pH值通常在7.35-7.4左右,因此哺乳動(dòng)物細胞對pH值很敏感。橙色和淺橙色之間的顏色通常都表明細胞需要換液或者已經(jīng)足夠生長(cháng),通過(guò)分泌乳酸(細胞代謝的副產(chǎn)物,對細胞有毒)使周?chē)慕橘|(zhì)變酸,這個(gè)時(shí)候若細胞密度太大就選擇傳代。


    七、細胞狀態(tài)就是力量!

    當用一個(gè)新的細胞系開(kāi)始培養時(shí),將細胞生長(cháng),將其等分成若干小瓶,冷凍,除一個(gè)外,其余全部?jì)Υ嬖谝旱小@鋬龅男∑拷M成了你的主庫存,而你可以用剩下的小瓶來(lái)生長(cháng)和冷凍額外的細胞,這些細胞可以作為你的工作庫存。這可以確保您有許多細胞儲存在其原始狀態(tài),一旦工作細胞變得太老化或污染。您還有之前的庫存細胞可以取代。這也確保了任何在實(shí)驗室需要新細胞的人都可以帶上一瓶“原始狀態(tài)"的主庫存,而不是“借用"已經(jīng)經(jīng)過(guò)多次傳代并可能被污染的細胞。


    八、注意實(shí)驗用的細胞代次

    注意傳代次數。細胞在高傳代數(>30-40倍)時(shí)會(huì )改變它們的生長(cháng)速度和形態(tài),這取決于細胞系,所以舊細胞應該退役!相反,第3-4代年輕的細胞太年輕,不應該在立即用于重要的轉染實(shí)驗。額外的傳代可以讓你的細胞獲得穩定的生長(cháng)速度。

    在你的盤(pán)子和/或燒瓶上貼上你的名字、日期、你使用的細胞系和它的通道號是一種很好的做法。特別是在一個(gè)多人從事不同工作的實(shí)驗室里,這將有助于你避免意外混合造成交叉污染,也有助于你保持良好的實(shí)驗記錄。


    九、及時(shí)滅菌是細胞的狂歡!

    最后,但并非最不重要的一點(diǎn)是,任何用于再利用的實(shí)驗室材料(例如,用于液體廢物的巴斯德移液管)在每次使用前都應消毒。此外,所有受污染的液體和固體廢物在處理前應進(jìn)行高壓滅菌。

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